細胞計數
PBMC（外周血單個核細胞）是免疫學功能研究中最常用的細胞模型，如細胞增殖、細胞毒性、細胞因子分泌等。如何精確、快速、簡便計數PBMC以及精確分析PBMC活力，是免疫學研究以及免疫治療領域至關重要的步驟。常規的計數方法有臺盼藍細胞計數、雙熒光法AO/PI細胞活率計數。
1. 臺盼藍細胞計數法
臺盼藍（Trypan Blue）是組織和細胞培養中最常用的死細胞鑒定染色方法之一?；罴毎粫蝗境伤{色，而死細胞會被染成藍色。細胞計數一般用血細胞計數板，便于確定細胞的生長狀況。
機理：正常的活細胞，胞膜結構完整，能夠排斥臺盼藍，使之不能夠進入胞內；而喪失活性或細胞膜不完整的細胞,胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失，即可認為細胞已經死亡。因此，借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區分活細胞和死細胞。
實驗內容與方法:
1. 制備細胞懸液 將細胞用培養基（Thawing Medium）制備成適當濃度的細胞懸液備用，建議使用3ml巴氏吸管混勻細胞。
常規的稀釋倍數
2. 染色 取10ul細胞懸液與10ul臺盼藍染液混合。
3. 細胞計數
（1）計數板處理 用無水乙醇或 95% 乙醇溶液擦拭計數板后，用綢布擦凈，另擦凈蓋玻片一張，把蓋片覆在計數板上。
（2）加樣 從計數板邊緣緩緩滴入染色后的懸液，懸液充滿計數板和蓋片之間的空隙中。注意不要使液體流到旁邊的凹槽中或帶有氣泡，否則要重做。稍候片刻，將計數板放在低倍鏡下（10×10 倍）觀察計數。
（3）計數方法 按圖計算計數板的四角大方格（每個大方格又分 16 個小方格）內的細胞數。
Ø 計數時，只計數完整的細胞，若聚成一團的細胞則按一個細胞進行計數。
Ø 在一個大方格中，如果有細胞位于線上，一般計下線細胞不計上線細胞，計左線細胞不計右線細胞。二次重復計數誤差不應超過 ±5%。
Ø 鏡下觀察，凡折光性強而不著色者為活細胞，染上藍色者為死細胞。
細胞計數公式：活細胞數目=大方格細胞數目平均值x稀釋倍數x __ mL =__ x 104
細胞活力公式：活細胞數目÷細胞總數= __%
2. 雙熒光法AO/PI
AO/PI試劑由可以發出綠色熒光的DNA結合染料吖啶橙（AcridineOrange，簡稱AO）和可以發出紅色熒光的DNA結合染料碘化丙啶（Propidiumiodide，簡稱PI）組成。其中AO可以通過完整的細胞膜，嵌入所有細胞（活細胞和死細胞）的細胞核，呈現綠色熒光；PI只能通過不完整的細胞膜，即死細胞的細胞膜，嵌入所有死細胞的細胞核，呈現紅色熒光。
由于AO和PI為DNA結合染料，因此可有效排除雜質以及紅細胞的干擾，確保對樣品進行準確計數。
目前臺盼藍計數還是市場上主流的細胞計數方法。但在細胞治療行業，需要測量復蘇時的免疫細胞活率和數量，臺盼藍的技術原理已經不能滿足其需求，雙熒光AO/PI計數的方法變得越來越普及。
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